2022-07-18 10:47:16
來源: 成都壹科醫療
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PCR管采購介紹
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PCR技術類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
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PCR由變性一退火—延伸三個基本反應步驟構成。這個反應過程在PCR反應容器中進行,隨著基因擴增儀的不斷發展,其反應容器也經歷了從1.5ml到0.2ml (0.25m1)的離心管逐步發展成PCR專用的薄壁的0.2ml,0.1mlpcr管。
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隨著pcr擴增反應數量的提高,逐步形成了PCR條、PCR板高通量的基因擴增容器。
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PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成
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模板DNA的變性:
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模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,以便它與引物結合,為下輪反應做準備。
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模板DNA與引物的退火(復性):
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模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右后,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合。
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引物的延伸:
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DNA模板——引物結合物在Taq的作用下,以dNTP為反應原料,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。
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PCR技術的基本原理
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該技術是在模板DNA、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下,依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應。
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DNA聚合酶以單鏈DNA為模板,借助一小段雙鏈DNA來啟動合成,通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段互補序列結合,形成部分雙鏈。
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在適宜的溫度和環境下,DNA聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3′-OH末端,并以此為起始點,沿模板5′→3′方向延伸,合成一條新的DNA互補鏈。
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PCR管和離心管的區別
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PCR管:
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PCR反應板是96孔或者384孔,是專門為批量反應設計的,其原理是PCR儀和測序儀的通量一般為96或者384。
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離心管:
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離心管不一定是PCR管,離心管按照其容量分好多種,常用的有1.5ml,2ml,5ml,15或者50ml,最小的一種((250ul)可作為PCR管使用。
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如何選擇PCR管
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我們選擇PCR管的放置位置是希望選擇溫度最準確的位置。
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而溫度最準確的位置應該是模塊下溫度傳感器上面的位置(不考慮傳感器溫度不準的問題)。
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而不同PCR儀的溫度傳感器的位置是不一樣的。
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比如AB的2720只有一個在中間,MJ的200有三個傳感器,為左下、中間和右上,Eppendorf的應該是在A行或H行,而東勝龍811則有三個溫度傳感器,應選擇B1-2,C1-2,C6-7,D6-7,B11-12,C11-12,因為這些點是溫度準點。
2023-02-14 11:51:52
成都壹科醫療
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2022-07-18 16:11:34
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